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常見(jiàn)問(wèn)題之HIS標(biāo)簽蛋白沒(méi)有被洗脫下來(lái)

蛋白掛柱后洗脫不下來(lái)主要是因?yàn)榈鞍缀椭咏Y(jié)合能力太強(qiáng)或者洗脫條件太溫和，我們可以從以下幾方面考慮解決問(wèn)題。1、洗脫條件太溫和：重新摸索洗脫條件，增加緩沖液中咪唑濃度或者適當(dāng)降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分（換成tris-HCl緩沖液）。2、蛋白在柱子中沉淀：適當(dāng)降低上樣量或蛋白濃度，用咪唑線性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度，或者在變性的條件下洗脫（加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍）。3、非特異性的疏水或者其他作用：在洗脫液中加非離子的添加劑...

慢病毒構(gòu)建原理

慢病毒載體（Lentivirus）是一類(lèi)改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體，是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組是RNA，其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒?？衫媚孓D(zhuǎn)錄酶將外源基因整合到基因組中實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，具有感染分裂期與非分裂期細(xì)胞的特性?！袈《净蚪M進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞漿中反轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA，回到細(xì)胞漿中，表達(dá)目的蛋白；或產(chǎn)生小RNA。慢病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)或小...

帶你學(xué)會(huì)一種藥物研究利器——等溫滴定量熱法

等溫滴定量熱法(IsothermalTitrationCalorimetry,ITC)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種研究生物熱力學(xué)與生物動(dòng)力學(xué)的重要方法，它通過(guò)高靈敏度、高自動(dòng)化的微量量熱儀連續(xù)、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)和記錄一個(gè)變化過(guò)程的量熱曲線，原位、在線和無(wú)損傷地同時(shí)提供熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)信息。ITC檢測(cè)方式與化學(xué)反應(yīng)中的酸堿滴定法相似，在ITC測(cè)定中，首先將一種反應(yīng)物置于一個(gè)溫控樣品池中，并通過(guò)一個(gè)熱電偶回路與一個(gè)參比池相偶聯(lián)，樣品池和參比池處于相同的外部環(huán)境。特定的滴定劑（按實(shí)驗(yàn)需要選擇）定...

NK細(xì)胞是屬于什么細(xì)胞呢？

NK（自然殺傷細(xì)胞）通過(guò)整合識(shí)別MHCI分子的激活和抑制類(lèi)受體的信號(hào)對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行識(shí)別，對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行直接殺傷，同時(shí)不損傷自身健康細(xì)胞。人體NK細(xì)胞占血液和其他部位中淋巴細(xì)胞的5%-20%，含量豐富，在抗病毒和抗腫瘤免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用。NK是控制急性和慢性病毒感染所必需的，同時(shí)NK能夠促進(jìn)多種腫瘤直接裂解，在不同部位巡邏防止轉(zhuǎn)移。NK細(xì)胞功能的多面性顯示出其在免疫介導(dǎo)的保護(hù)和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)平衡中具有動(dòng)態(tài)作用。根據(jù)CD56和抗體結(jié)合Fc受體CD16的表達(dá)水平，人類(lèi)NK可細(xì)分為成熟度和功能...

抗痩素納米抗體制備及篩選

瘦素是一種與能量代謝、免疫、生殖等相關(guān)的多功能細(xì)胞因子，其在血液中的含量異常會(huì)導(dǎo)致肥胖、營(yíng)養(yǎng)不良、心血管疾病、腫瘤、肝病等多種疾病，特別是終末期腎衰患者廣泛存在瘦素水平過(guò)高的問(wèn)題，由此導(dǎo)致腎衰癥患者營(yíng)養(yǎng)不良、高血壓、胰島素抵抗等并發(fā)癥，這些并發(fā)癥嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量，因此開(kāi)發(fā)特異性抗體實(shí)現(xiàn)瘦素水平的檢測(cè)與去除將具有非常重要的臨床意義。納米抗體由于其諸多優(yōu)良特點(diǎn)，成為該方面研究的選擇。獲得足夠量的抗原是進(jìn)行抗體篩選的前提，由于血液中瘦素含量較低，進(jìn)行了瘦素的制備，然后進(jìn)行抗...

為什么大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)需要二氧化碳培養(yǎng)箱

細(xì)胞培養(yǎng)基的pH一般在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖體系是一種生理pH緩沖體系(是人體血液中最重要的pH緩沖體系)，大多數(shù)培養(yǎng)基都是用它來(lái)維持穩(wěn)定的pH值，用粉末配制培養(yǎng)液時(shí)，往往需要加入一定量的碳酸氫鈉。對(duì)于大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖體系的培養(yǎng)液，為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以維持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳濃度。同時(shí)，用于細(xì)胞培養(yǎng)的容器需要一定程度的通風(fēng)，以便于氣體的交換。使用其他pH緩沖系統(tǒng)是否不需要二氧化碳培養(yǎng)箱？已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，由于空...

警惕！細(xì)胞系的交叉污染可能是毀掉你實(shí)驗(yàn)的元兇

您是否有過(guò)這樣的經(jīng)歷……新買(mǎi)到的細(xì)胞或者實(shí)驗(yàn)室傳了幾代的細(xì)胞，又或者是儲(chǔ)存于超低溫冰箱幾年不用的細(xì)胞，需要用到時(shí)腦海里一直有著這樣的問(wèn)題困擾著你，被污染了么?鑒定正確么？用它做研究會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果么?據(jù)統(tǒng)計(jì)約30%細(xì)胞系被交叉污染或錯(cuò)誤辨識(shí)，只因使用了交叉污染或錯(cuò)誤辨識(shí)的細(xì)胞而導(dǎo)致研究結(jié)論錯(cuò)誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細(xì)胞治療災(zāi)難性后果……，這將浪費(fèi)大量時(shí)間、精力和金錢(qián)。世人皆知，細(xì)胞身嬌體貴難養(yǎng)活，養(yǎng)好細(xì)胞實(shí)屬不易。而這其中最煩的是污染、最怕的是掉包。因?yàn)楸M管研究僧們有方法把一切污...

安諾倫代理Atlas Antibodies品牌產(chǎn)品——活動(dòng)好價(jià)熱銷(xiāo)中

AtlasAntibodies是提供人類(lèi)蛋白圖譜(HPA)認(rèn)證抗體的供應(yīng)商。傳承HPA優(yōu)秀科研基因，擁有強(qiáng)大的供應(yīng)能力，提供針對(duì)所有人類(lèi)蛋白質(zhì)的高品質(zhì)抗體。HPA項(xiàng)目于2003年由瑞典研究人員發(fā)起，運(yùn)用人類(lèi)蛋白抗體和轉(zhuǎn)錄組學(xué)，對(duì)人體正常及癌變細(xì)胞組織樣本進(jìn)行免疫染色(IHC)，建立shi界上第一個(gè)以IHC染色結(jié)果為主的、可供開(kāi)放訪問(wèn)的人類(lèi)蛋白圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，以推動(dòng)人類(lèi)在新型診斷、治療靶點(diǎn)和創(chuàng)新藥等領(lǐng)域的探索。該項(xiàng)目成立之初便在科學(xué)界引起強(qiáng)烈反響，無(wú)數(shù)科學(xué)家希望獲得這些抗體用于研究...