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PRODUCTS CNTERDNA 凝膠回收試劑盒(DNA Gel Extraction Kit),是一種用于從 DNA瓊脂糖凝膠中回收目的 DNA 的試劑盒。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系和可高效、專一性吸附 DNA 的硅膠柱,從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段,通過離心力或者負壓讓含有核酸的溶液通過硅膠膜,使核酸在特定溶液環(huán)境中吸附在硅膠膜上,經過洗滌、洗脫等步驟得到純的核酸。
使用步驟
使用前請先在漂洗液 Buffer PW 中加入 12 mL 無水乙醇。1.將單一的目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下 (盡量切除多余部分)放入干凈的離心管中,稱取凝膠重量(去除空管重量),100 mg凝膠等同于 100 L體積,作為一個凝膠體積注:若回收的 DNA 片用于克隆,須避免紫外照射損傷 DNA。盡量減少紫外暴露時間。
2.向膠塊中加入 1 倍體積 Buffer PE(如果凝膠重為 0.1g,則加入100 uL Buffer PE)。50-60C水浴溶膠5-10 min,期間溫和地上下翻轉離心管,以確保膠塊充分溶解。(若膠塊的體積過大,可事先將膠塊切成碎塊。)
3.將上一步所得溶液加入一個吸附柱中,室溫放置 1min,12,000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放回收集管中。注:吸附的容量為750L,若上步得到的液大于 750L,可分批加入。
4.在吸附柱中加入 300 uL Buffer PE,12,000 rpm 離心 1 min,棄廢液,將吸附柱放回收集管中。
5.在吸附柱中加入 700 uL Bufer PW(確認已加入無水乙醇),12,000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放回收集管中。
6.重復一次步驟 5。
7.吸附柱放回收集管后,12.000 rpm 離心 2 min,盡量除盡漂洗液注意:可將吸附柱置于室溫放置數分鐘,以防止殘留的乙醇影響后續(xù)的酶反應(酶切PCR等)實驗。
8.將吸附柱放入干凈的 1.5 mL 離心管中,開蓋室溫靜置 5 min。向吸附膜中間位置加入 30 uL Buffer PB 或 ddHO (洗脫液應先放置于水浴鍋中預熱) ,室溫放置 2 min,12,000 rpm 離心2 min,收集DNA 溶液。
注意:洗脫體積不應小于30 l,體積過少影回收率。為了提高 DNA 的回收量,可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中,12,000 rpm 離心 2 min,將DNA 液收集到離心管中?;厥沾笥? KB 片,建議 BuflerPB 預熱至55 C以提升回收效率。DNA 也可以用 ddH0 洗脫。DNA 產應保存在-20C以防DNA 降解。
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