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關(guān)于細(xì)胞自噬，這些你都知道嗎？

細(xì)胞自噬是指在自噬相關(guān)基因的調(diào)控下，利用溶酶體降解自身受損的細(xì)胞器及大分子物質(zhì)的過程，以此維持細(xì)胞自身的需要及細(xì)胞器的更新。一、細(xì)胞自噬的基本概念及特征1、自噬的過程細(xì)胞質(zhì)中的線粒體等細(xì)胞器首先被稱為“隔離膜”的囊泡所包被,這種“隔離膜”主要來自于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體;囊泡逐漸閉合最終形成雙層膜結(jié)構(gòu),即自噬體，其大小約為500nm左右，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等;自噬體的外膜與溶酶體融合形成降解自體吞噬泡；由溶酶體內(nèi)的酶降解自體吞噬泡...

蛋白定量有哪些方法？

蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時(shí)間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法筆者均有使用經(jīng)驗(yàn)，相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，也無需配置反應(yīng)試劑，...

做實(shí)驗(yàn)不會制備細(xì)胞爬片怎么行?

我們在做免疫熒光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測（TUNEL）時(shí)，免不了要制備細(xì)胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。今天，就教大家如何制備好的細(xì)胞爬片。一.實(shí)驗(yàn)材料及試劑蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等；75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基（RPMI-1640*培養(yǎng)基）、胰酶等。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容爬片準(zhǔn)備：1、24*24蓋玻片，剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養(yǎng)皿中爬片。2.蓋玻片泡酸過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸...

安諾倫銷售Agrisera品牌產(chǎn)品——植物抗體ling航者

Agrisera公司成立于1980年，位于瑞典，長期以來，公司致力于植物/環(huán)境科學(xué)研究中所需蛋白抗體研發(fā)與銷售，以專注于研發(fā)高品質(zhì)稀有單克隆及多克隆抗體而在業(yè)界有較高知ming度。其抗體主要涉及植物蛋白，Agrisera公司提供1000種用于植物和藻類細(xì)胞生物學(xué)研究的一抗，2000多種二抗。Agrisera公司提供的抗體分兩大類：植物及藻類的抗體，以及細(xì)菌、真菌、昆蟲、魚等動物類抗體。針對植物蛋白質(zhì)的保守氨基酸序列，Agirsera還du家開發(fā)了數(shù)十種通用抗體（globala...

快速抗體制備服務(wù)

抗體的產(chǎn)生，是圍繞B淋巴細(xì)胞的激活與分化為漿細(xì)胞進(jìn)行的。在shou次免疫過程中，抗原首先經(jīng)多種兔疫相關(guān)淋巴或巨噬細(xì)胞吞噬充分暴露抗原,并將抗原呈遞給靜止B淋巴細(xì)胞，以使其活化，活化后的B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，也就是抗體的產(chǎn)生者。由于抗原的表面存在多種抗原識別決定簇，因此在經(jīng)過免疫相關(guān)細(xì)胞加工后，呈遞給B淋巴細(xì)胞的抗原決定簇也是多種多樣的，理論上，一個(gè)B淋巴細(xì)胞只接受-種抗原決定簇，產(chǎn)生-種對應(yīng)與之結(jié)合的抗體，多個(gè)B淋巴細(xì)胞就會產(chǎn)生多種識別抗原不同抗原決定簇(也就是表位)的抗體...

質(zhì)粒DNA提取實(shí)驗(yàn)

在我們的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會用到質(zhì)粒DNA，那么具體是怎么來的呢？今天講的是DNA的提取步驟。前提：細(xì)菌繁殖步驟（挑單克隆，置于LB培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫?fù)u床搖過夜，180-200rpm）。一般市面上有很多試劑盒可供大家使用，大體步驟都差不多的啦~~我按照我所使用的試劑盒（AxyPrep中抽試劑盒）的步驟分享如下：收集1.50ml離心管收集過夜搖菌的LB培養(yǎng)液（此時(shí)可以做一下判斷，如果液體未變渾濁，說明細(xì)菌并未繁殖成功，這樣肯定難以提出DNA；如果液體渾濁，便說明細(xì)菌繁殖成功啦...

常見問題之蛋白在真核細(xì)胞的表達(dá)量低？

實(shí)際上真核生物的蛋白也可以用真核細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)，而且效果往往更好。用原核生物來表達(dá)主要還是因?yàn)椴僮骱唵危焖?。如果希望表達(dá)和純化的蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)原核系統(tǒng)表達(dá)之后仍然有正確的折疊構(gòu)象，那么使用原核表達(dá)系統(tǒng)就很合適了。有的時(shí)候在不同的表達(dá)體系里面對蛋白的表達(dá)量是有影響的。當(dāng)構(gòu)建完成后攜帶有信號肽的時(shí)候，一些蛋白在真核表達(dá)體系中表達(dá)量極低。去除信號肽序列值后，直接表達(dá)成熟肽，表達(dá)水平明顯提高。所以說構(gòu)建的真核表達(dá)載體高表達(dá)mRNA卻檢測不到目的蛋白是*有可能的。

常見問題之影響蛋白表達(dá)因素有哪些？

1.蛋白本身的特性：蛋白分子量大小、蛋白來源/物種、是否為毒性蛋白，蛋白翻譯后修飾程度、蛋白自身結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度2.宿主的選擇：宿主本身的特性、蛋白表達(dá)需求等都影響著蛋白表達(dá)3.蛋白需求量：蛋白應(yīng)用范圍對應(yīng)的需求量不同，所以要根據(jù)需求量確定表達(dá)系統(tǒng)4.質(zhì)粒載體的選擇：載體是攜帶外源基因的工具，要根據(jù)系統(tǒng)選擇合適的載體才能使蛋白更好的表達(dá)5.融合標(biāo)簽的選擇：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋...