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PRODUCTS CNTER當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心分子生物學(xué)平臺分子生物學(xué)實驗實驗外包慢病毒轉(zhuǎn)染穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系構(gòu)建
慢病毒構(gòu)建并包裝后,以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下:1. 對慢病毒基因進行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力,但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時進行對包裝細胞的轉(zhuǎn)染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒。
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ARTICLES慢病毒構(gòu)建并包裝后,以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下:
1. 對慢病毒基因進行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力,但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。
2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時進行對包裝細胞的轉(zhuǎn)染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒。
3. 使用上述獲得的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染目的細胞。
4. 根據(jù)慢病毒攜帶的標(biāo)記基因,轉(zhuǎn)染得到的細胞進行熒光蛋白檢測或加入抗生素進行細胞篩選。
5. 熒光性強或者克隆數(shù)多的細胞系加以傳代培養(yǎng)并保存。
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