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ARTICLES核酸提取包括樣品裂解和核酸純化兩大步驟。樣品的裂解使核酸游離在裂解體系中,純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分,如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)*分離的過程。
免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry, ICC) , 是將免疫學(xué)基本原理與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合所建立起 來的新技術(shù),根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn),檢測細(xì)胞內(nèi)某種多肽、白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大 分子物質(zhì)的存在與分布。用標(biāo)記抗體與組織切片標(biāo)本孵育,抗體則與細(xì)胞中相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,結(jié) 合部位被標(biāo)記物顯示,則在顯微鏡下觀察到該肽或蛋白質(zhì)的分布。
免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation) 是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相 互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。
DNA甲基化主要形成5 -甲基胞嘧啶(5-mC) 和少量的N6-甲基腺嘌呤(N6-mA) 及7 -甲基鳥嘌呤 (7-mG)。DNA的甲基化可引起基因的失活,可引|起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白 質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。根據(jù)研究水平,甲基化的檢測分為三種:基因組甲基化水平 (MethylationContent)的分析,候選基因甲基化的分析以及基因組層次的DNA
基步移(genomic walking)實(shí)驗(yàn)用以鑒定已經(jīng)克隆的特定DNA片段側(cè)翼順序的方法。肥經(jīng)被鑒腚 的特定DNA片段一端或兩端的末端片段為探針去篩選基因組DNA文庫, DNA-端或兩端并與之重疊的克隆 進(jìn)行篩選與定。然后用新鑒定克隆中與原始克隆DNA非共有的一端的片股作探針,進(jìn)行新的篩選與鑒 定。依次類推,可以弄清跨度為幾百個(gè)kb的連接片段?;熃M步移分為基因組結(jié)合文庫的染色體步移技術(shù) 和基于
基因定點(diǎn)突變服務(wù) 基因定點(diǎn)突變即按照設(shè)計(jì)要求,使基因的特定序列發(fā)生插入、刪除、置換和重排等變異。利用PCR等 方法向目的DNA引入突變。定點(diǎn)突變能迅速、高效低提高DNA所表達(dá)的目的蛋白的形狀及表征,使基因研 究工作中的有效手段。體外定點(diǎn)突變的方法包括:寡核苷酸介導(dǎo)的定點(diǎn)突變、PCR介導(dǎo)的定 點(diǎn)突變以及盒 式突變。
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