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Northern Blot或稱RNA印跡,是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達的分子生物學操作。通過檢測細胞分化過程中或細胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達情況可觀察到細胞調控或了解細胞功能等。
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ARTICLES或稱RNA印跡,是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達的分子生物學操作。通過檢測細胞分化過程中或細胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達情況可觀察到細胞調控或了解細胞功能等。
Northern blotting技術流程包括采用電泳分離RNA,隨后通過與目的RNA互補的雜交探針進行對目的RNA的檢測。由于核算帶負電荷,因此帶有正電荷的聚酰胺膜有較高的膜轉移效率。并且轉移緩沖液常含有甲酰胺,其可降低探針和RNA結合所需溫度,因此可降低RNA在高溫下變性的風險。RNA轉移到膜后,通過UV或加熱可與膜進行共價結合。隨后加入已標記的探針進行探針和目的RNA的片段的雜交,并進行膜的洗滌以洗去未特異性結合的探針已消除背景。后,雜交信號可被X-ray檢測并且進行定量。
操作流程大致如下:
1. RNA的提取
2. 電泳
3. 將RNA從變性膠轉移到硝酸纖維素膜或尼龍膜
4. UV或熱固定法將RNA固定到膜上
5. 探針標記
6. 雜交,洗膜
7. 圖像分析
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