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ARTICLES1. 基因調(diào)取與腺病毒穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建 針對客戶感興趣的基因,從NCBI網(wǎng)站上得到目的基因CDS區(qū)信息并設(shè)計引物,從文庫中調(diào)出基因,克隆至腺病毒系統(tǒng)穿梭載體(Pshuttle-CMV)。如需克隆的為基因突變體,則將基因克隆至穿梭載體后,行若干次點突變,至得到需要的突變體為止。
siRNA表達載體構(gòu)建可應(yīng)用于:(1)作為后基因組時代基因功能分析的有力工具;(2)基因組學(xué)、細胞信號傳導(dǎo)通路分析;(3)藥物靶點篩選、疾病治療。
質(zhì)粒構(gòu)建 流程: 1. 目的基因的PCR擴增 2. PCR產(chǎn)物純化 3. 載體和PCR產(chǎn)物進行雙酶切 4. 膠回收 5. 載體與目的基因的連接 6. 轉(zhuǎn)化 7. 菌落PCR鑒定 8. 重組質(zhì)粒的抽提
慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,使用慢病毒載體,能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加,能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達。
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