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ARTICLES薄切片可提高顏料、探針和抗體的可及性,且和降低不同細(xì)胞層空間疊加造成的影響。對于光學(xué)顯微鏡,石蠟是常用的硬質(zhì)切割材料。切片后,石蠟組織切片可有多種用途,如免疫組織化學(xué)染色,和用以研究基因表達(dá)、蛋白表達(dá),DNA突變等研究的原位雜交實(shí)驗(yàn)。
蘇木素(Hematoxylin)-伊紅(Eosin)染色法,簡稱HE染色法。蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。HE染色提供良好的核漿對比染色,是細(xì)胞化學(xué)染色常用的一種方法。
酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。分為夾心法,間接法和競爭法三種。
含熒光蛋白的載體可作為轉(zhuǎn)染標(biāo)記來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,以進(jìn)行活細(xì)胞標(biāo)記。其不含MCS。在這些載體中,熒光蛋白可以持續(xù)表達(dá),并且可以被熒光顯微鏡或流式細(xì)胞檢測到,因此可以提供可觀的轉(zhuǎn)染/共轉(zhuǎn)染或移植實(shí)驗(yàn)后對細(xì)胞的監(jiān)控的證據(jù)。
FISH(fluorescence in situ hybridization)技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。基本原理:如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的,二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。
原位雜交(In situ hybridization)是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交,DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。按其作用方式分為固相雜交和液相雜交。
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