蛋白表達(dá)是指細(xì)胞通過基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程產(chǎn)生蛋白質(zhì)的過程,是生物體內(nèi)蛋白質(zhì)合成的關(guān)鍵步驟。蛋白質(zhì)是生物體中最重要的分子之一,不僅參與細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能,還承擔(dān)著調(diào)節(jié)生物體代謝和生理功能的重要作用。因此,對蛋白表達(dá)的研究不僅對于揭示生物體內(nèi)部的機(jī)制具有重要意義,還有著廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
在常見的實(shí)驗(yàn)室研究中,人們通常需要大量的特定蛋白來進(jìn)行進(jìn)一步的分析或應(yīng)用。為了獲得所需的蛋白,研究人員需要對目標(biāo)基因進(jìn)行表達(dá),即將目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄成mRNA,再通過翻譯過程轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)。目前,人們常用的方法有原核細(xì)胞(如大腸桿菌)和真核細(xì)胞(如哺乳動物細(xì)胞)表達(dá)蛋白的方法。
在原核細(xì)胞表達(dá)蛋白的過程中,研究人員通常將目標(biāo)基因插入表達(dá)載體中,并將表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌等細(xì)菌中,利用其快速生長和易于操作的特點(diǎn),通過誘導(dǎo)表達(dá)的方式獲得目標(biāo)蛋白。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、產(chǎn)量高,但也存在一些缺點(diǎn),如對目標(biāo)蛋白的翻譯后修飾有限,導(dǎo)致目標(biāo)蛋白產(chǎn)生的可能不夠純凈。
與原核細(xì)胞表達(dá)相比,真核細(xì)胞表達(dá)蛋白的過程更為復(fù)雜。在哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行蛋白表達(dá),通常需要將目標(biāo)基因?qū)胝婧思?xì)胞(如CHO細(xì)胞、HEK293細(xì)胞等),利用真核細(xì)胞對蛋白后修飾的優(yōu)勢,獲得更為天然的目標(biāo)蛋白。雖然真核細(xì)胞表達(dá)更接近生物體內(nèi)合成蛋白的過程,但其操作復(fù)雜,產(chǎn)量較低,成本也相對較高。
為了克服各種表達(dá)系統(tǒng)的缺點(diǎn),近年來也出現(xiàn)了多種改進(jìn)的表達(dá)技術(shù)。例如,通過重組DNA技術(shù)制備高效表達(dá)載體,通過融合表達(dá)技術(shù)獲得更穩(wěn)定和高產(chǎn)量的蛋白,通過信號肽引導(dǎo)蛋白的分泌表達(dá)等。這些技術(shù)的出現(xiàn),使得蛋白表達(dá)更為靈活和高效,為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究提供了更多的可能性。