單抗制備是一種通過體外合成技術(shù)獲得的具有高度特異性的抗體分子。制備單克隆抗體的過程通常包括以下幾個步驟:免疫動物免疫、細(xì)胞融合、篩選和鑒定、擴(kuò)增和純化。
通過將目標(biāo)抗原物質(zhì)注射到免疫動物體內(nèi),激發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特定抗體。常用的免疫動物包括小鼠、兔子、山羊等??乖镔|(zhì)可以是純化的蛋白質(zhì)、多肽片段、細(xì)胞表面的膜蛋白等。免疫動物在一定時間內(nèi)被多次免疫,使其產(chǎn)生刺激和增殖抗體產(chǎn)生細(xì)胞(常使用的是小鼠骨髓瘤細(xì)胞)。
接下來,將抗體產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,形成雜交瘤細(xì)胞(Hybridoma)。雜交瘤細(xì)胞是由兩個細(xì)胞融合而成,具有抗體產(chǎn)生的特性和骨髓瘤細(xì)胞的無限增殖能力。這種產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞具有雙倍體的染色體,保留了淋巴細(xì)胞的抗體產(chǎn)生能力和骨髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力。
然后,通過篩選和鑒定,篩選出具有特異性的單克隆抗體。首先,將雜交瘤細(xì)胞分裝于多孔板中,使單克隆抗體分泌到培養(yǎng)液中。然后,對培養(yǎng)液中進(jìn)行鑒定,檢測抗體的特異性和親和力。一般的鑒定方法包括酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、免疫組織化學(xué)染色等。通過篩選和鑒定,確定具有特異性和親和力的單克隆抗體。
對鑒定出的單克隆抗體進(jìn)行擴(kuò)增和純化,以獲得足夠的數(shù)量和高純度的抗體。擴(kuò)增可以通過培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞來實(shí)現(xiàn),雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)基中持續(xù)增殖并分泌抗體。純化過程包括抗體的沉淀、洗滌和濃縮等步驟,以從培養(yǎng)液中獲得純凈的單克隆抗體。
單抗制備如何存儲:
1.根據(jù)存儲液的要求,加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎┮员3挚贵w的穩(wěn)定性。
2.定期監(jiān)測單抗的存活率和純度,確保存儲的抗體質(zhì)量。
3.避免多次凍融,每次使用后迅速將剩余的單抗分裝成小份并重新凍存。
4.儲存單抗的容器要密封好,防止空氣中的水分進(jìn)入。
5.注意記錄存儲抗體的詳細(xì)信息,包括批號、濃度、儲存時間等。
6.盡量避免長時間暴露在室溫下,以防抗體的降解和凝集。
7.嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)操作規(guī)程,確保單抗的安全使用。