技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES表面等離子共振分析(SPR)是一種強(qiáng)大的生物檢測(cè)技術(shù),它通過(guò)測(cè)量生物分子間相互作用時(shí)引起的折射率變化來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)生物分子的結(jié)合和解離過(guò)程。SPR技術(shù)基于金屬表面(通常是金)上的電磁場(chǎng)分量與入射光相互作用,產(chǎn)生表面等離子體波,當(dāng)這些波與入射光的速度匹配時(shí),會(huì)發(fā)生共振現(xiàn)象,即SPR。
SPR分析方法的關(guān)鍵步驟包括:
生物分子的固定:將一種生物分子(配體)固定在傳感器芯片表面。這可以通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)、親和捕獲或使用特殊化學(xué)基團(tuán)(如巰基)實(shí)現(xiàn)。
樣品進(jìn)樣:將含有能與固定分子相互作用的生物分子(分析物)的溶液流過(guò)傳感器芯片表面,通過(guò)微流控系統(tǒng)控制樣品流動(dòng)。
數(shù)據(jù)采集:利用SPR光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)實(shí)時(shí)跟蹤溶液與芯片表面的分子結(jié)合和解離過(guò)程,記錄相應(yīng)的SPR信號(hào)變化。
數(shù)據(jù)分析:使用分析軟件處理實(shí)驗(yàn)過(guò)程中獲取的信號(hào),通過(guò)結(jié)合式相互作用模型擬合反應(yīng)曲線,確定動(dòng)力學(xué)常數(shù)和親和力常數(shù)。
芯片再生:在分析結(jié)束后,使用適當(dāng)?shù)木彌_液和條件將芯片上的分析物洗去,恢復(fù)芯片表面,以便進(jìn)行下一輪實(shí)驗(yàn)。
SPR技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于無(wú)需標(biāo)記、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、高靈敏度和能夠提供動(dòng)力學(xué)參數(shù)等。它已被廣泛應(yīng)用于藥物篩選、臨床診斷、蛋白質(zhì)組學(xué)研究等領(lǐng)域。然而,為了獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果,需要仔細(xì)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),考慮非特異性結(jié)合、質(zhì)量傳輸限制和選擇合適的擬合模型等因素。
在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和優(yōu)化方面,需要考慮適當(dāng)?shù)年?yáng)性和陰性對(duì)照、緩沖液pH、流速、配體和分析物的濃度等,以確保獲得高質(zhì)量的SPR數(shù)據(jù)。此外,SPR成像技術(shù)(SPRI)允許同時(shí)處理數(shù)百到數(shù)千個(gè)樣本,是實(shí)現(xiàn)高通量篩選的一種有效方法。
總之,SPR技術(shù)是一種多功能、高靈敏度的生物檢測(cè)方法,適用于各種生物分子相互作用的研究和分析。
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下一個(gè):表面等離子共振分析——艾柏森
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