多抗制備(也稱為多克隆抗體制備)是指利用多個克隆的抗體來識別和結(jié)合不同的抗原。由于每個克隆的抗體針對不同的抗原特異性,可以增加對不同抗原的識別能力和靈敏度。制備步驟包括:抗原免疫、動物免疫(多次免疫)、細胞融合、雜交瘤細胞克隆、篩選和培養(yǎng)。
抗原免疫通常是一種可以誘導機體產(chǎn)生免疫應答的物質(zhì),例如蛋白質(zhì)、多糖類、抗原肽等??乖梢酝ㄟ^多種途徑引入動物體內(nèi),例如注射、喂食等。在抗原免疫過程中,動物的免疫系統(tǒng)會產(chǎn)生相應的抗體。
接下來是動物免疫。為了增強抗體的免疫應答,通常需要進行多次免疫。在每次免疫后,動物體內(nèi)會產(chǎn)生越來越多的免疫反應,從而產(chǎn)生具有不同親和性的抗體。
細胞融合是多抗制備的關鍵步驟。細胞融合通常使用兩種細胞,一種是來自免疫動物體內(nèi)的B淋巴細胞,它們具有產(chǎn)生抗體的能力;另一種是腫瘤細胞,它們具有無限增殖能力。將這兩種細胞進行融合,可以得到具有抗體產(chǎn)生能力和無限增殖能力的雜交瘤細胞。
接下來是雜交瘤細胞克隆。融合后的細胞形成雜交瘤,其中大部分細胞都是沒有雜交成功的或者沒有產(chǎn)生抗體的。需要通過稀釋法將雜交瘤細胞分為單個細胞克隆,這樣可以獲得產(chǎn)生特定抗體的細胞克隆。
然后是篩選和培養(yǎng)。通過特定的抗原檢測方法,篩選出可以產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞克隆。篩選后的細胞克隆會被大規(guī)模培養(yǎng),以產(chǎn)生足夠多的抗體供應。
多抗制備的應用領域:
1.生物學研究:確定和鑒定細胞表面標記物、分析細胞及其分子表達的變化,例如在疾病發(fā)展和治療過程中。
2.臨床診斷:檢測和識別不同的疾病標志物,例如腫瘤標志物、傳染病病原體等,用于早期診斷和疾病監(jiān)測。
3.藥物研發(fā):篩選和鑒定潛在藥物靶點、評估藥物的作用機制、驗證藥物的有效性和安全性。
4.免疫組織化學:免疫組織化學染色和免疫組織學檢測,用于確定細胞和組織的特異性標記物、解析組織的分子特征。
5.農(nóng)業(yè)和食品科學:鑒定、檢測和監(jiān)測農(nóng)作物病原體、食品中的致病微生物和有害物質(zhì),用于提高農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì),確保食品安全。
6.生物工程和生物制藥:生物工程和生物制藥過程中,例如檢測和定量重組蛋白質(zhì)的含量和純度,監(jiān)測產(chǎn)品質(zhì)量和一致性。