多抗制備時(shí)整個(gè)流程可采用同一種免疫部位,也可以多種部位聯(lián)合使用,但是初次免疫都建議在皮下進(jìn)行。在制備單抗時(shí),甚至還可以將脾臟取出進(jìn)行體外免疫,脾臟免疫的優(yōu)勢(shì)就是可以大大減小免疫劑量并縮短周期,而且還可以解決高同源性蛋白無法免疫成功的問題。但體外免疫不能形成完整的免疫應(yīng)答反應(yīng),抗體無法成熟,所產(chǎn)生的抗體全部為IgM,不能產(chǎn)生其它類型的抗體。
免疫形式??乖ǔP枰c佐劑混合充分后才進(jìn)行免疫,也有改進(jìn)不用佐劑的方法,比如可以將抗原跑SDS-PAGE膠,然后將膠進(jìn)行磨碎充分即可進(jìn)行免疫,這樣可以將抗原(蛋白質(zhì)類抗原)純化,而且還可以延緩抗原的釋放。也有人將抗原從SDS-PAGE膠上轉(zhuǎn)移到NC膜上或者PVDF膜上然后將其磨碎進(jìn)行免疫,還有人將抗原連接到瓊脂顆粒等固相載體上,這樣可以增加抗原的顆粒化程度,也可以增大抗原與機(jī)體免疫應(yīng)答系統(tǒng)的接觸
免疫周期。免疫后,一般在10-15d左右抗體的產(chǎn)量會(huì)達(dá)到一個(gè)峰值,但是此時(shí)抗體親和力不夠,大部分都是IGM,因此需要進(jìn)行加強(qiáng)免疫,加強(qiáng)免疫一般在初次免疫后三至四周進(jìn)行。第二次、第三次加強(qiáng)免疫間隔可以縮短至2-3周。這個(gè)時(shí)間不太能長(zhǎng)也不能太短,太短起不到加強(qiáng)的效果,而且還容易引起免疫耐受,如果相隔太久,則前面的免疫將失去初步刺激的效果。如果是采用脾內(nèi)免疫,則可以在一定程序上縮短免疫周期。
多抗制備技術(shù)經(jīng)歷了三代:
·一代抗體是傳統(tǒng)的抗體制備方法即利用抗原免疫動(dòng)物后獲得抗體,稱為多克隆抗體(polyclonal antibody);
·二代抗體是通過雜交瘤技術(shù)制備出針對(duì)抗原中某一抗原決定簇的抗體稱為單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb);
·三代抗體是利用基因工程技術(shù)制備而來,稱為基因工程抗體(genetic engineering antibody)。