納米抗體制備表現(xiàn)出高親合力、高特異性、強(qiáng)穿透性和易于改造和表達(dá)等特點(diǎn),并且由于可以獲得抗體完整序列,納米抗體可以通過體外重組表達(dá)高質(zhì)量穩(wěn)定生產(chǎn),有效避免傳統(tǒng)抗體的批次間差異問題。
和傳統(tǒng)抗體相比,納米抗體分子量小,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。而得益于分子量小的優(yōu)勢(shì),納米抗體制備更進(jìn)一步具有多個(gè)特征,使得納米抗體在新藥物發(fā)現(xiàn)方面表現(xiàn)出巨大的潛力:
1.高耐熱性和穩(wěn)定性
將不同的納米抗體在37放置1周,結(jié)果其抗原結(jié)合活性均在80%以上,表明納米抗體在室溫下保存相當(dāng)穩(wěn)定,這使其比常規(guī)抗體更易于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。
比較了鼠單抗和納米抗體在高達(dá)90高溫長(zhǎng)時(shí)間處理的抗原結(jié)合活性,發(fā)現(xiàn)納米抗體都保持了較高的活性仍能重新獲得抗原結(jié)合能力,而所有常規(guī)抗體在90處理后都喪失了活性,發(fā)生了不可逆的聚合。
在惡劣條件,如在高熱、離液劑、存在蛋白酶和極度pH值變性的條件下(如胃液和內(nèi)臟中),正??贵w會(huì)失效或分解,而納米抗體仍具有高度的穩(wěn)定性。
2.高抗原結(jié)合性:
納米抗體*的結(jié)構(gòu)決定了其高抗原結(jié)合特性:納米抗體較長(zhǎng)的CDR3,可形成一穩(wěn)定的暴露的凸環(huán)結(jié)構(gòu)(凸環(huán)中具有穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的二硫鍵),能夠深入抗原內(nèi)部以更好的結(jié)合抗原從而提高了其抗原特異性和親和力。
而傳統(tǒng)抗體Fab片段及單鏈抗體scFv的抗原結(jié)合表面常形成凹形拓?fù)浣Y(jié)構(gòu), 通常只能識(shí)別位于抗原表面的位點(diǎn),因此納米抗體VHH單域具有更加廣泛的抗原結(jié)合力,甚至當(dāng)靶蛋白緊密包裹隱藏了普通抗體識(shí)別的位點(diǎn)時(shí),納米抗體也可以對(duì)其進(jìn)行表位識(shí)別。
3.較強(qiáng)的組織穿透力:
納米抗體具有強(qiáng)而快的組織穿透能力,可以進(jìn)入致密的組織如實(shí)體瘤發(fā)揮作用;并且多余未結(jié)合的納米抗體能夠很快的被清除,這相對(duì)于單克隆抗體組織穿透力差,不易被清除的不足,更有利于疾病的診斷。另外,納米抗體能夠有效的穿透血腦屏障,這樣的特性為腦部給藥提供了新方法,有望成為治療老年癡呆癥的新藥。
4.高水溶性、高表達(dá)性
正??贵wVH結(jié)構(gòu)域單獨(dú)表達(dá)時(shí)通常形成包涵體,或者暴露的疏水域相互黏附;而納米抗體VHH由于其FR2中的疏水殘基被親水殘基所取代,使得納米抗體的水溶性增加,聚合性減少;而且即使以包涵體形式表達(dá),也很容易復(fù)性,這樣可以大大提高作為藥物的利用率。
因納米抗體分子量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,由單一的基因編碼,所以它很容易在微生物中合成,能在噬菌體、酵母等微生物中大量的表達(dá),而且其相對(duì)價(jià)格低廉、可進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn),易于普及和應(yīng)用。有報(bào)道,可通過酵母反應(yīng)器釀造將納米抗體的產(chǎn)量提高,每公升可達(dá)1克的產(chǎn)量。
納米抗體制備的應(yīng)用優(yōu)勢(shì):
用于生物醫(yī)藥研發(fā)(基因工程藥物研發(fā)、ADC藥物研發(fā));
用于臨床體外診斷(膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法、電化學(xué)發(fā)光法);
用于腫瘤研究、免疫學(xué)研究等基礎(chǔ)研究;申請(qǐng)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的發(fā)明及科研獎(jiǎng)項(xiàng);
拓展研究思路、發(fā)表國(guó)際學(xué)術(shù)刊物。