在體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估，原料占70%，工藝占20%，思路占10%。按《體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則》，主要的分析性能評(píng)估項(xiàng)目有：檢測(cè)限、線性范圍、可報(bào)告范圍、準(zhǔn)確度（回收實(shí)驗(yàn)）、準(zhǔn)確度（方法學(xué)比對(duì)）、精密度、干擾實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性、參考值。目前國(guó)際上通常是以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化組織（CLSI）的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。產(chǎn)品性能評(píng)估是產(chǎn)品研發(fā)、制定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)等過程的重要技術(shù)支持研究過程，并可能對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成一定影響。在整個(gè)研發(fā)過程中，涉及原料、工藝和思路，因?yàn)樾袠I(yè)處于黃金發(fā)展階段，很少去關(guān)注和優(yōu)化整個(gè)研發(fā)流程，如果沒理順這三者關(guān)系，整個(gè)研發(fā)流程會(huì)陷入盲目與不可持續(xù)。剛接觸研發(fā)時(shí)，一般是以現(xiàn)有體系，包含穩(wěn)定的配方體系（包被緩沖液、封閉緩沖液、酶標(biāo)緩沖液、校準(zhǔn)品稀釋液、發(fā)光底物液）和工藝流程，一切就著拿來主義，用已有的配方，就著已有的工藝，按著流程操作，多數(shù)工作用于篩選配對(duì)，分析數(shù)據(jù)。這個(gè)入門階段，一般至少維持2-3年，因?yàn)榕浞襟w系和工藝體系（以下簡(jiǎn)稱工藝，包含配方和體系）是前人通過大量研究成果而建立的，一般比較穩(wěn)定，較少修改（就算要改進(jìn)，權(quán)限也是在研發(fā)總監(jiān)手中），加上整個(gè)研發(fā)思路已經(jīng)流程化，不用思考太多。很多新技術(shù)員，通過這種配對(duì)篩選后，會(huì)從一定數(shù)量的配對(duì)中篩選出比較合適的配對(duì)，進(jìn)行下一環(huán)節(jié)研發(fā)，很容易就得出，一個(gè)試劑盒好壞，基本取決于原料質(zhì)量，如果沒有篩選到好原料，或者碰到難項(xiàng)目，就無從入手。我們將原料、工藝和思路，細(xì)細(xì)拆解來分析，目的是理清性能評(píng)估項(xiàng)目中，哪些項(xiàng)目是原料決定的，哪些項(xiàng)目是工藝決定的，哪些項(xiàng)目是兩者共同影響的，促進(jìn)研發(fā)思路的形成與成熟，希望能夠拋磚引玉。

1原料

我們將免疫試劑中關(guān)鍵原料提煉出來，分為兩塊：抗原抗體和特殊成分。
01抗原抗體

免疫試劑一般可以分為兩個(gè)過程：免疫反應(yīng)和顯色反應(yīng)。免疫反應(yīng)是核心，將待測(cè)物特異性地從復(fù)雜樣本中分離出來，這一環(huán)節(jié)的好壞，直接決定整個(gè)試劑的核心質(zhì)量。

在工業(yè)生產(chǎn)上，免疫檢測(cè)用的抗體，一般是通過工程菌表達(dá)抗原片段，免疫動(dòng)物，進(jìn)行多克隆或者單克隆抗體制備，然后得到的抗體，進(jìn)行配對(duì)篩選，選出合適的配對(duì)應(yīng)用于免疫檢測(cè)。在這個(gè)過程中，由于待測(cè)抗原一般都是天然抗原（少數(shù)科研檢測(cè)重組抗原），而制備和篩選抗體一般又是使用重組抗原，因此會(huì)帶來很多應(yīng)用問題，這個(gè)對(duì)抗體制備商來說，值得重視。

02特殊成分 

免疫反應(yīng)做為一個(gè)脆弱的非共價(jià)鍵結(jié)合過程，整個(gè)反應(yīng)受時(shí)間、干擾物、橋聯(lián)物、結(jié)構(gòu)類似物等影響，為消除這些不良影響，一般在緩沖體系中會(huì)增加一些特殊成分，這些特殊成分我們定義為次要原料，在工藝中詳述。

2工藝

工藝包含配方體系和工藝流程，兩者相輔相成。所有的配方和工藝，是為保障和提高產(chǎn)品性能而設(shè)計(jì)的，當(dāng)原料無法滿足產(chǎn)品性能要求時(shí)，如何通過配方工藝來提高，或者說，哪些性能能通過配方工藝來提高，如何來提高，哪些只能由原料決定，這個(gè)在我們研發(fā)職業(yè)生涯中，要不斷積累與完善。

01配方體系 

配方體系可以拆解為緩沖體系和改進(jìn)體系。

（1）緩沖體系 一般的緩沖體系，在教科書、產(chǎn)品說明書、論文中均可見到，主要包含離子對(duì)類型、離子濃度、pH值等內(nèi)容，非保密配方，比較容易理解與掌握。

（2）改進(jìn)體系 因?yàn)槊庖叻磻?yīng)的非共價(jià)鍵結(jié)合的脆弱性，依靠一個(gè)簡(jiǎn)單緩沖體系，要獲得很好的反應(yīng)結(jié)果，是比較困難的，針對(duì)這種問題，科學(xué)家設(shè)計(jì)了各種改進(jìn)體系，這些體系下面，又有各種方法產(chǎn)生。

A、降低本底體系

使用合適的包被、標(biāo)記濃度，一般采用棋盤滴定確定。

加入增加溶解率，降低非特異吸附的物質(zhì)，如曲通、吐溫。

B、減少干擾體系

加入正常鼠血清或者鼠IgG，降低人抗鼠抗體影響

加入阻斷劑，降低類風(fēng)濕因子干擾

C、減少前帶效應(yīng)體系

適當(dāng)提高包被和標(biāo)記濃度，兼顧本底

加入檢測(cè)抗體裸抗，兼顧靈敏度

D、增加靈敏度體系

加入曲通、吐溫等

加入特殊物質(zhì)，如S19

E、提高檢出率體系

多個(gè)抗體聯(lián)合使用，如CnTI項(xiàng)目

F、提高穩(wěn)定性體系

緩沖液加入保護(hù)性蛋白、糖類、小分子化合物

G、等等其他體系 隨著研究深入，這個(gè)目錄會(huì)不斷增加，相應(yīng)的方法也會(huì)不斷增多。

02工藝流程  

工藝流程，又包含生產(chǎn)工藝流程和試劑盒檢測(cè)操作工藝流程兩個(gè)方面。

（1）生產(chǎn)工藝流程 生產(chǎn)工藝流程，對(duì)整個(gè)的產(chǎn)品性能，有非常大的影響，比如預(yù)包被板制備工藝，包被、封閉、干燥的溫度、時(shí)間，對(duì)整個(gè)性能影響很大，需要研發(fā)摸索。

（2）檢測(cè)操作工藝流程 相比生產(chǎn)工藝，試劑盒的檢測(cè)操作工藝，對(duì)性能影響更大，一步法、兩步法，加樣量，加樣順序，溫育溫度，溫育時(shí)間。

3思路

我們分析原料與工藝，就是為了找到一個(gè)合適的研發(fā)思路，指導(dǎo)研發(fā)過程，提高研發(fā)效率，整個(gè)研發(fā)思路，我們?cè)賱澐譃楫a(chǎn)品研發(fā)和改進(jìn)研發(fā)兩個(gè)問題。
01產(chǎn)品研發(fā)

產(chǎn)品研發(fā)是一個(gè)從無到有的過程，多數(shù)是根據(jù)市面上已有的試劑，研發(fā)自己公司沒有的產(chǎn)品。這個(gè)過程占研發(fā)的大頭，我們?cè)賹⑵浼?xì)分為初步研發(fā)、預(yù)臨床實(shí)驗(yàn)和穩(wěn)定性測(cè)試三個(gè)過程。所有的研發(fā)，我們都必須知道，一個(gè)性能項(xiàng)目，他是怎么評(píng)估的，哪些因素會(huì)影響這個(gè)性能，如何改進(jìn)，我們以雙抗體夾心為例列舉。

（1）初步研發(fā) 初步研發(fā)時(shí)，一般重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)三個(gè)活性成分：包被抗體、檢測(cè)抗體、校準(zhǔn)品。包被抗體和檢測(cè)抗體，會(huì)有一個(gè)經(jīng)驗(yàn)濃度，校準(zhǔn)品一般用合適基質(zhì)，將抗原或者高值樣本進(jìn)行梯度稀釋，獲取的梯度濃度進(jìn)行第三方賦值，追溯到國(guó)際、國(guó)家或者企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品。

初步研發(fā)多數(shù)是在做配對(duì)篩選，只需要用檢測(cè)限、線性范圍、可報(bào)告范圍這三個(gè)性能評(píng)估項(xiàng)目，即可篩選出候選配對(duì)。比如拿到10株抗體，可以做成100個(gè)配對(duì)，進(jìn)行篩選，選出初步可用的候選配對(duì)若干對(duì)。

對(duì)初篩的候選配對(duì)，進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確度（回收實(shí)驗(yàn)）、干擾實(shí)驗(yàn)評(píng)估，通過這些實(shí)驗(yàn)，再二次篩選候選配對(duì)。

（2）預(yù)臨床實(shí)驗(yàn) 不涉及臨床血清樣本的初步研發(fā)都完成后，獲得一定的候選配對(duì)，進(jìn)行預(yù)臨床實(shí)驗(yàn)，主要是評(píng)估準(zhǔn)確度（方法學(xué)比較）和參考值區(qū)間。

（3）穩(wěn)定性測(cè)試 通過上面兩個(gè)步驟，試劑盒初步成型，活性組分（包含預(yù)包被板、校準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體）的穩(wěn)定性，需要一一評(píng)價(jià)與改進(jìn)，直到滿足要求。

02改進(jìn)研發(fā) 

整個(gè)試劑盒的研發(fā)，最終就是為了檢測(cè)臨床血清樣本，所有的分析性能評(píng)估項(xiàng)目，也是為這個(gè)目的而設(shè)計(jì)，但是在整個(gè)研發(fā)過程中，不管是預(yù)臨床試驗(yàn)，還是正式臨床試驗(yàn)，配對(duì)測(cè)試的臨床血清樣本量，是非常有限的，頂多就算是完成一個(gè)小試生產(chǎn)。到真正產(chǎn)品上市和臨床應(yīng)用時(shí)，隨著樣本量的擴(kuò)大，很多之前沒有暴露的問題，都會(huì)集中暴露，必須收集足夠數(shù)據(jù)，進(jìn)行改進(jìn)研發(fā)。

一般這個(gè)階段，就是針對(duì)臨床不符合的樣本，特別是假陽(yáng)性、假陰性樣本，要對(duì)樣本進(jìn)行不同廠家試劑檢測(cè)比對(duì)，成分分析等等，這個(gè)過程在預(yù)臨床和正式臨床都會(huì)做，在預(yù)臨床和正式臨床時(shí)，還要對(duì)檢測(cè)值嚴(yán)重不符，但并未導(dǎo)致假陽(yáng)、假陰性的樣本，進(jìn)行分析。