對(duì)于
抗體制備有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩?,才能產(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強(qiáng)和效價(jià)高)的抗體。
在免疫期間,不僅各個(gè)不同的動(dòng)物,而且同一動(dòng)物在不同的時(shí)間內(nèi)抗血清效價(jià)、特異性、親協(xié)力等都可能發(fā)生變化,因而必須經(jīng)常地采血測(cè)試。只有在對(duì)抗血清的效價(jià)、特異性、親協(xié)力等方面作*的評(píng)價(jià)后,才可使用所取得的抗血清。
抗體制備抗血清的特異性測(cè)定:
抗血清的特異性或稱專一性是指抗血清對(duì)相應(yīng)的抗原及近似的抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。特異性好就是抗血清的識(shí)別能力強(qiáng)。通常,特異性是以交叉反應(yīng)率來(lái)表示的。交叉反應(yīng)率低,表示抗血清的特異性好,反之則特異性差。交叉反應(yīng)率一般是用競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線來(lái)判定的。以不同濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率(B/T或B/B0),求出各IC50時(shí)的濃度,按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
S=y/Z×100%;
S-交叉反應(yīng)率,y-IC50時(shí)抗原濃度,Z-IC50時(shí)近似抗原物質(zhì)的濃度。
如某抗原的IC50濃度為90Pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)IC50濃度幾乎是無(wú)窮大,可以說(shuō)這一抗血清與其它抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似零,即無(wú)交叉反應(yīng),該抗血清的特異性是好的。
免疫細(xì)胞化學(xué)的技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強(qiáng)、親協(xié)力大、滴度高的特異性抗體,由于每種抗原都有幾個(gè)抗原決定簇,用它免疫動(dòng)物將產(chǎn)生對(duì)各個(gè)決定簇的抗體,即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個(gè)產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而形成的雜交廇細(xì)胞經(jīng)無(wú)性繁殖而來(lái)的細(xì)胞群所產(chǎn)生的,所以它的免疫球蛋白屬同一類型,質(zhì)地純一,而且它是針對(duì)某一抗原決定簇的,因此特異性強(qiáng),親合性也一致。